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精子核蛋白染色试剂盒(苯胺蓝染色法)

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批准文号:国食药监械(准)字2008第3400624号

库存情况:现货、预订

配送方式:上海自提或第三方快递

商品价格:电议

产品标签:蓝染 苯胺 试剂 鱼精蛋白

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国食药监械(准)字2008第3400624号

产品特点:
精子核蛋白染色试剂盒(苯胺蓝染色法)要用于成年男性精子核蛋白的染色,便于医生显微镜下观察成熟精子及计算不成熟精子比例。评估精子成熟率对生育的影响。
本试剂无须特殊仪器,简单、快速、准确。
包装规格:20人份/盒、40人份/盒。
精子核蛋白染色试剂盒(苯胺蓝染色法)的详细资料:
【精子核蛋白染色试剂盒(苯胺蓝染色法)品    名】
精子权威五联检:精子核蛋白染色试剂盒(苯胺蓝染色法)
【研发依据】
正常情况下,与精核DNA结合的碱性蛋白(核蛋白)将经历从组蛋白到鱼精蛋白的自然成熟过程,这种成熟后的鱼精蛋白对精子基因(DNA)具有特殊保护作用。
组蛋白被鱼精蛋白逐渐取代的过程,称之为精子核蛋白组型转换,这种组型转换具有重要的生理意义。但当核蛋白组型转换异常可引起男性不育或胚胎早期夭折流产,其机理为:①精子DNA不稳定且易受损伤而难以受孕;②一旦受精,由于核蛋白组型异常,精子核不能正常解聚,从而影响了雌雄原核的融合;③胚胎不能正常发育,造成胚胎夭折而流产。
【精子核蛋白染色试剂盒(苯胺蓝染色法)预期用途】
主要用于成年男性精子核蛋白的染色,以此评估成年男性精子成熟比例,可评价男性生育功能。
【试剂特点】无须特殊仪器,简单、快速、准确。
【精子核蛋白染色试剂盒(苯胺蓝染色法)检验原理】
成熟精子的核蛋白成份为鱼精蛋白,富含精氨酸和胱氨酸残基;不成熟精子的核蛋白成份为组蛋白,富含赖氨酸残基。酸性条件下,苯胺蓝与赖氨酸残基结合生成紫蓝色化合物,从而指示不成熟核蛋白的存在,而核蛋白成熟的精子则染成红色。
【组成成份】
试剂主要由苯胺蓝、氧杂蒽、冰醋酸、磷酸盐缓冲液等配制而成。
规格
组  份
20人份/盒
40人份/盒
A液(10×浓缩洗涤液)
10ml×1瓶
20ml×1瓶
B液(固定液)
5ml×1瓶
10ml×1瓶
C液(染色液)
5ml×1瓶
10ml×1瓶
D液(10×浓缩洗脱液)
10ml×1瓶
20ml×1瓶
E液(复染液)
5ml×1瓶
10ml×1瓶
防脱载玻片
20片
40片
说明书
1份
1份
【样本要求】液化后的新鲜精液标本
【精子核蛋白染色试剂盒(苯胺蓝染色法)操作方法】
1.试剂的准备
1)洗涤工作液的配制:A液(10×浓缩洗涤液)以蒸馏水10倍稀释,4℃保存备用;
2)洗脱工作液的配制:D液(10×浓缩洗脱液)以蒸馏水10倍稀释,4℃保存备用。
2.样本准备
1)新鲜精液标本置于37℃恒温水浴箱中完全液化。
2)精子的洗涤及稀释,方法如下: ①在Eppendorf管中加入0.2—0.5ml的精液和洗涤工作液1ml,以一次性吸管反复吹打精子数次后,2000转离心5min,弃去上清液,保留管底精子沉淀团; ②在Eppendorf管中加入洗涤工作液1.5ml,以一次性吸管反复吹打精子数次后,2000转离心5min,弃去上清液,保留管底精子沉淀团; ③再次重复②的操作,离心结束后,弃去上清液。④在Eppendorf管中加入洗涤工作液约0.1—0.2ml,混合精子悬液。
3.检测步骤
1)取上述已制备好的精子悬液15μl,均匀涂布于防脱载玻片上,自然干燥。
2)在涂有待测精子的涂片区内,滴加B液(固定液)2—3滴,室温反应2min。
3)以流水轻轻冲去载玻片上的试剂(注意控制水流速度,以免洗脱涂片区内的精子),甩去多余水份(注意防止涂片干燥)。
4)在涂有待测精子的涂片区内,滴加C液(染色液)2—4滴,室温反应5min。
5)以流水轻轻冲去载玻片上的试剂(注意控制水流速度,以免洗脱涂片区内的精子),并甩去多余水份(注意防止涂片干燥)。
6)将载玻片竖直插入已盛有洗脱工作液的反应池中,使待测标本涂片区完全浸没于洗脱工作液中,室温反应5min。
7)以流水轻轻冲去载玻片上的试剂(注意控制水流速度,以免洗脱涂片区内的精子),并甩去多余水份(注意防止涂片干燥)。
8)在涂片区内滴加E液(复染液)2—4滴,室温反应5min。
9)以流水轻轻冲去载玻片上的试剂(注意控制水流速度,以免洗脱涂片区内的精子),迅速吹干玻片。(如果需要长久保存该涂片样本,可选择完成以下脱水步骤:分别将组织片依次置于70、90和100乙醇中各2min,晾干。)
10)镜检。
【精子核蛋白染色试剂盒(苯胺蓝染色法)染色结果】
核蛋白不成熟的精子染色呈紫蓝色或紫色,核蛋白成熟的精子染色呈红色。
【参考值】 DFI(单链DNA精子)<10为正常;当DFI>25时,受精率<20。
【精子核蛋白染色试剂盒(苯胺蓝染色法)注意事项】
1.受试者应按照WHO技术规范采集精液标本。
2.若精液标本粘稠度高或液化不完全,可导致检测结果非特异性假阳性。需要预先降低精液粘度或促进精液完全液化后,才能用于检测。
3. 精子密度过高可能导致脱色不均匀,从而对检测结果产生不良影响;精子密度过低则不会影响检测结果;涂片时应避免涂布过于稠密。
4. 精子洗涤不充分可影响显微镜观察结果。
5. 染紫蓝色精子为核蛋白不成熟精子,染红色精子为核蛋白成熟的精子。由于精子核蛋白存在组蛋白-鱼精蛋白的过渡期,因此此类精子头部呈淡蓝色或紫色;精子头部局部染淡蓝色或紫色、顶体膜边缘染紫蓝色,均是精子不够成熟的表现。
6. 镜下观察结果时,不要在精子堆集分布的区域计数,应选择精子散在分布的区域进行计数。
7. 受检者所有样品均应视为潜在的传染源,检测完毕的样本、试剂均须作为医疗废物处理,避免污染环境。
8.精子核蛋白染色试剂盒为体外诊断试剂,检测结果仅供临床参考,对患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其它实验室检查及治疗反应等情况结合考虑。
规  格:20人份/盒、40人份/盒
存储条件及有效期:试剂盒于2-8℃避光保存,有效期12个月


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